RT-PCR檢測SARS-CoV-2的外部同行評審在分子和方法學水平上揭示了10個基本的科學缺陷：假陽性結果的後果。

親愛的讀者，今天我們將以愛因斯坦教授（摘自11年1943月XNUMX日聯合猶太上訴電台的廣播):

“對真理和知識的追求是一個人能夠做的最美麗的事情之一，即使對這種追求的自豪感大多落在那些最不喜歡這種追求的人的嘴上。”

世界已經過去了將近一年 電暈大流行 受僱。 已經採取了許多措施來控制局勢。 DTT科學罐團隊的我們從未討論過電暈大流行的話題。 原因很簡單。 為了形成關於某個主題的科學見解，您需要一個健康且受人尊敬的爭議，尤其是在科學方面。 好的科學家一直都這樣做。 如果僅查看量子物理學的歷史以及科學家之間的各種傳奇之爭，您就會了解科學的運作方式。 不幸的是發生在現在 電暈危機 直到現在，幾乎不厭倦適當的爭執。

不用說，政府採取各種措施的基礎是 PCR測試 代表。

2019年初發表的作品： 實時RT-PCR檢測2019年新型冠狀病毒（2019-nCoV） -在這裡找到（https://www.eurosurveillance.org/content/10.2807/1560-7917.ES.2020.25.3.2000045)

作者:

Victor M Corman，Olfert Landt，Marco Kaiser，Richard Molenkamp4，Adam Meijer，Daniel KW Chu6，Tobias Bleicker1，SebastianBrünink，Julia Schneider，Marie Luisa Schmidt1，Daphne GJC Mulders4，Bart L Haagmans，Bas van der Veer，Sharon van den Brink ，麗莎·維斯曼（Lisa Wijsman），加布里埃爾·戈德斯基（Gabriel Goderski），讓·路易·羅密特（Jean-Louis Romette），喬安娜·埃利斯（Joanna Ellis），瑪麗亞·贊博恩（Malan Zambon），馬利克·佩里斯（Malik Peiris），赫爾曼·古森斯（Chertal Reusken），馬里恩·PG·庫普曼斯（Marion PG Koopmans），克里斯蒂安·德羅斯頓（Christian Drosten）   

是已知的。 它曾經而且可能仍然被認為是實施 PCR測試.

在不涉及工作細節的情況下，我們想談一談 審查報告 為了吸引註意：

圖片來源：

對RTPCR測試進行外部同行審查以檢測SARS-CoV-2，揭示了在分子和方法學水平上的10個主要科學缺陷：假陽性結果的後果 -在這裡找到（https://cormandrostenreview.com/report/)      

Autoren：

Pieter Borger，Bobby Rajesh Malhotra，Michael Yeadon，Clare Crai，Kevin McKernan，Klaus Steger，Paul McSheehy，Lidiya Angelova，Fabio Franchi，Thomas Binder，Henrik Ullrich，Makoto Ohashi，Stefano Scoglio，Marjolein Didburg-van Kleffens，Dorothea Gilbert，Rainer Klement，Ruth Schruefer，Berber W.Pieksma，Jan Bonte，Bruno H.Dalle Carbonare，Kevin P.Corbett，UlrikeKämmerer             

      
本文將評論的要點翻譯成德語：來源（https://cormandrostenreview.com/report/):

RT-PCR檢測SARS-CoV-2的外部同行評審在分子和方法學水平上揭示了10個基本的科學缺陷：假陽性結果的後果。

在標題為“實時RT-PCR檢測2019年新型冠狀病毒（2019-nCoV）“（Eurosurveillance 25（8）2020）作者提供了診斷工作流程和RT-qPCR協議，用於檢測和診斷2019-nCoV（現稱為 SARS冠狀病毒2）他們聲稱已通過驗證，並為公共衛生實驗室提供了可靠的診斷方法。 考慮到該出版物對全球社會的影響，一組獨立的研究人員對上述出版物進行了逐點審查，其中

1）已對所提供測試設計的所有組件進行了交叉檢查，

2） RT-qPCR協議建議 已通過良好實驗室實踐評估

和

3）參數已使用該領域的相關科學文獻進行了檢查。

那出版了 RT-qPCR協議 用於2019-nCoV的檢測和診斷，並且手稿存在許多技術和科學錯誤，包括引物設計不充分，有問題和不適當的引物 RT-qPCR協議 而且缺乏確切的 測試驗證。 提出的測試或手稿本身都不符合可接受的科學出版物的要求。 此外，未提及作者的嚴重利益衝突。 最後，從提交到接受出版物之間的很短時間（24小時）表明， 同行評審過程 要么沒有在這裡執行，要么質量很差。 我們提供了一些科學上的不足之處的令人信服的證據， 缺陷和缺陷。

鑑於此處提出的科學和方法上的缺陷，我們相信， 歐洲監視 別無選擇，只能發表 去取出.

紙張中發現的缺陷的簡要目錄

達斯 Corman-Drosten紙 包含以下特定錯誤：

1.在此方案中沒有指定理由使用這些極高濃度的引物。 所描述的濃度導致增加的非特異性結合和PCR產物擴增，這使得該測試不適合作為檢測SARS-CoV-2病毒的特異性診斷工具。

2.六個未指定的擺動位置會導致該測試在實際實驗室中的巨大差異； Corman-Drosten論文中令人困惑的，不確定的描述不適合作為標準的工作方案，這使得該測試不適合作為識別SARS-CoV-2病毒的特定診斷工具。

3.測試無法區分整個病毒和病毒片段。 因此，該測試不能用作完整（傳染性）病毒的診斷工具，這意味著該測試不適合作為識別SARS-CoV-2病毒的特定診斷工具，並且可以得出關於是否存在SARS-CoV-XNUMX病毒的結論。感染。

4.相對於引物對10（RdRp_SARSr_F和RdRp_SARSr_R）的退火溫度Tm而言，相差1°C也使該測試不適合作為鑑定SARS-CoV-2病毒的特定診斷工具。

5.致命的錯誤是缺少Ct值，在該值下樣品被認為是陽性和陰性。 在隨後的應用程序中也找不到該Ct值，這使得該測試不適合用作檢測SARS-CoV-2病毒的特定診斷工具。

6. PCR產物尚未在分子水平上驗證。 這一事實使該協議無法用作檢測SARS-CoV-2病毒的特定診斷工具。

7. PCR測試沒有明確的陽性對照來評估其對SARS-CoV-2的特異性，也沒有陰性對照以排除其他冠狀病毒的存在，這使該測試成為鑑定SARS-CoV-2的特定診斷工具病毒不合適。

8. Corman-Drosten論文中的測試設計如此模糊和有缺陷，以至於可以朝許多不同的方向前進。 沒有標準化的東西，也沒有SOP。 這強烈質疑該測試的科學有效性，使其不適合作為鑑定SARS-CoV-2病毒的特定診斷工具。

9.最有可能的是，Corman-Drosten論文沒有經過同行評審，這使該測試不適合作為識別SARS-CoV-2病毒的特定診斷工具。

10.我們發現至少有四位作者存在嚴重的利益衝突，此外，Corman-Drosten論文的兩位作者（Christian Drosten和Chantal Reusken）是歐洲監視編輯委員會的成員。 29年2020月20日增加了利益衝突（Olfert Landt是TIB-Molbiol的董事總經理； Marco Kaiser是GenExpress的高級研究員，並且是TIB-Molbiol的科學顧問），但原始版本中並未聲明在PubMed中-版本仍然缺失）； TIB-Molbiol是根據“ Corman-Drosten手稿”中發布的協議生產PCR試劑盒（Light Mix）的“第一家”公司，並且以其自己的話說，在出版21之前出售了這些PCR測試試劑盒。 此外，Victor Corman和Christian Drosten也沒有提及他們的第二個分支機構：商業測試實驗室“ Labor Berlin”。 兩者都負責那裡的病毒診斷[XNUMX]，該公司活躍於實時PCR測試領域。

結論

關於哪種測試協議將被發布並使其可以普遍使用的決定權在Eurosurveillance手中。 決定承認在Corman-Drosten研究中顯而易見的錯誤的決定具有以下優點：將來可以最大程度地減少人員的成本和痛苦。
退出這份報告是否符合歐洲監管的最佳利益？ 我們的結論很明確。 考慮到此處描述的所有巨大的PCR協議設計缺陷和缺陷，我們得出的結論是，在科學完整性和責任感的框架內，沒有太多選擇。

[1] Corman Victor M，Landt Olfert，Kaiser Marco，Molenkamp Richard，Meijer Adam，Chu Daniel KW，Bleicker Tobias，BrüninkSebastian，Schneider Julia，Schmidt Marie Luisa，Mulders Daphne GJC，Haagmans Bart L，van der Veer Bas，van den Brink沙龍，Wijsman Lisa，Goderski Gabriel，Romette Jean-Louis，Ellis Joanna，Zambon Maria，Peiris Malik，Goossens Herman，Reusken Chantal，Koopmans Marion PG，Drosten Christian。 通過實時RT-PCR檢測2019年新型冠狀病毒（2019-nCoV）。 歐元監視。 2020; 25（3）：pii = 2000045。 https://doi.org/10.2807/1560-7917.ES.2020.25.3.2000045

[2] Dr.之間的電子郵件通訊。 彼得·博格（Peter Borger）和博士Adam Meijer：補充材料

[3] Jafaar等人，“ 3790定量聚合酶鏈反應–陽性樣品與陽性細胞培養物之間的相關性，包括1941年嚴重急性呼吸系統綜合症冠狀病毒2分離株”。 https://academic.oup.com/cid/advance-article/doi/10.1093/cid/ciaa1491/5912603

[4]英國廣播公司（BBC），21年2020月51185836日：https：//www.bbc.com/news/world-asia-china-XNUMX；
存檔： https://archive.is/0qRmZ

[5] Google Analytics-全球COVID19死亡：https：//bit.ly/3fndemJ
存檔： https://archive.is/PpqEE

[6] NIVD的COVID-19應急技術中心的實驗室測試
中國疾控中心15年2020月XNUMX日： http://www.chinacdc.cn/en/COVID19/202003/P020200323390321297894.pdf

[7]實時PCR手冊生命技術：https：//www.thermofisher.com/content/dam/LifeTech/global/Forms/PDF/real-time-pcr-
handbook.pdf Nolan T，Huggett J，Sanchez E.定量PCR（qPCR）應用的良好實踐指南，2013年第一版

[8] Trestan Pillonel等人，寫給編輯的信：通過實時RT-PCR檢測SARS-CoV-2： https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC7268274/

[9] Kurkela，Satu和David WG Brown。 “分子診斷技術。” 醫藥38.10
（2009）：535-540。

[10] Wolfel等人，《住院患者COVID-2019的病毒學評估》
https://www.nature.com/articles/s41586-020-2196-x

[11] Thermofischer Primer Dimer網絡工具：https://www.thermofisher.com/us/en/home/brands/thermo-scientific/molecular-biology/molecular-biology-learning-center/molecular-biology-resource-library /thermo-scientific-web-tools/multiple-primer-analyzer.html

[12] NCBI國家科學技術中心Primer-BLAST，信息： https://www.ncbi.nlm.nih.gov/tools/primer-blast/

[13] Marra MA，Steven JMJ，Caroline RA，Robert AH，Angela BW等。 （2003）Science。 SARS相關冠狀病毒的基因組序列。 科學300（5624）：1399-1404。

[14]嚴重急性呼吸系統綜合症冠狀病毒2株武漢-Hu-1，完整基因組： https://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/MN908947

[15] Borger P.預期會出現SARS樣冠狀病毒，但未做任何準備。 在J Biomed Sci Res 2020.https：//biomedgrid.com/pdf/AJBSR.MS.ID.001312.pdf
https://www.researchgate.net/publication/341120750_A_SARS-like_Coronavirus_was_Expected_but_nothing_was_done_to_be_Prepared;  存檔：https://archive.is/i76Hu

[16] Eurosurveillance文件評估/審查程序：https：//www.eurosurveillance.org/evaluation

[17] WHO的Corman-Drosten協議和手稿的正式建議，於13年2020月1.0日作為文檔的XNUMX版發布：https://www.who.int/docs/default-source/coronaviruse/wuhan-virus -測定-
v1991527e5122341d99287a1b17c111902.pdf; archive: https://bit.ly/3m3jXVH

[18]世衛組織對Corman / Drosten RT-qPCR協議的官方建議，該建議直接來自於Eurosurveillance-publication，文件版本2-1，發佈於
17th January 2020: https://www.who.int/docs/default-source/coronaviruse/protocol-v2-1.pdf?sfvrsn=a9ef618c_2

[19]歐洲監督編輯委員會，2020年： https://www.eurosurveillance.org/upload/site-assets/imgs/2020-09-Editorial%20Board%20PDF.pdf; 存檔：https：//bit.ly/2TqXBjX

[20] LightMix SarbecoV E-gene和EAV Control的使用說明，TIB-Molbiol和Roche Molecular Solutions，11年2020月40日：https://www.roche-as.es/lm_pdf/MDx_0776-96_200204_Sarbeco-E-gene_V09164154001_1（XNUMX ）.pdf
時間戳記檔案-11年2020月XNUMX日： https://archive.is/Vulo5;  存檔： https://bit.ly/3fm9bXH [21] Christian Drosten＆Victor Corman，負責柏林工黨的病毒診斷：
https://www.laborberlin.com/fachbereiche/virologie/  存檔：https：//archive.is/CDEUG

[22] Tom Jefferson，Elizabeth Spencer，Jon Brassey，Carl Heneghan病毒文化用於COVID-19傳染性評估。 系統評價。 系統評價doi：https://doi.org/10.1101/2020.08.04.20167932-XNUMX-XNUMX-XNUMX https://www.medrxiv.org/content/10.1101/2020.08.04.20167932v4

[23] Kim等人，SARS-CoV-2轉錄組的體系結構：https：//www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0092867420304062

[24] ECDC回复Dr. Dr. 彼得·博格（Peter Borger），18年2020月XNUMX日：補充材料

[25] Dr. Dr. UlrikeKämmerer及其團隊，調查和Primer-BLAST表